A型肉毒**對(duì)膝骨性關(guān)節(jié)炎大鼠模型鎮(zhèn)痛效果及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究（下）      

      3 討論

KOA 是一種以關(guān)節(jié)軟骨的變性、破壞、滑膜增生及骨質(zhì)增生為特征的慢性全關(guān)節(jié)退行性**[1]。本病多在中年后發(fā)病，是引起中老年人關(guān)節(jié)疼痛的*常見的原因。臨床主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、僵硬，且導(dǎo)致不同程度的活動(dòng)受限，甚至嚴(yán)重影響日常生活。膝骨性關(guān)節(jié)炎臨床**方法很多，口服止痛劑不能很好的達(dá)到緩解疼痛的目的，而且有**反應(yīng)和其他**相互作用限制了其應(yīng)用；關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射糖皮質(zhì)**和透明質(zhì)酸可以緩解疼痛，能在短期內(nèi)改善癥狀，但其療效及持續(xù)時(shí)間尚不穩(wěn)定；關(guān)節(jié)鏡清創(chuàng)術(shù)后有出現(xiàn)關(guān)節(jié)腔內(nèi)再次粘連及繼發(fā)滑膜炎的可能；關(guān)節(jié)置換有很高的手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)[3]。因此急需**慢性關(guān)節(jié)炎的**、有效的方法。

BTX-A 的藥理機(jī)制是與神經(jīng)肌肉接頭處突觸前膜的膽堿能神經(jīng)末梢快速結(jié)合后，通過裂解相關(guān)蛋白[5]，抑制乙酰膽堿的釋放，阻斷神經(jīng)肌肉間的傳導(dǎo)，減少肌肉的痙攣和收縮，因此早期廣泛用于**肌肉過度活動(dòng)性**，以及用于美容除皺等外科領(lǐng)域[6]。近年，將BTX-A 應(yīng)用于偏**、帶狀皰疹后神**[7]、糖尿病周圍神經(jīng)病變[8]、腰背痛等臨床研究中，均有明顯的**效果。研究表明，BTX-A 不僅可以使肌肉松弛，還能緩解由肌痙攣引起的疼痛，而且BTX-A 的鎮(zhèn)痛機(jī)制并不依賴對(duì)肌肉的松弛作用， 當(dāng)肌張力恢復(fù)正常后，它的鎮(zhèn)痛作用仍然很明顯[9]，可見BTX-A 對(duì)由肌痙攣或非肌痙攣引起的疼痛均有效果。表明肉毒**的鎮(zhèn)痛作用尚存在其他的機(jī)制。Weigand  H[10—11]等在貓模型中用125I 標(biāo)記的肉毒**行肌肉注射，注射后48h 鎮(zhèn)痛效果出現(xiàn)，且同時(shí)在貓背根神經(jīng)節(jié)及脊髓中發(fā)現(xiàn)了標(biāo)記的肉毒**。說(shuō)明肉毒**的作用與背根神經(jīng)節(jié)和脊髓密切相關(guān)，而背根神經(jīng)節(jié)是疼痛信號(hào)傳導(dǎo)的**級(jí)神經(jīng)元， 鈉離子通道Nav l.8 特異性表達(dá)在脊神經(jīng)節(jié)，在炎癥性和神經(jīng)病理性疼痛形成中起到有重要作用[12]。本研究擬通過觀察BTX-A 是否能對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎疼痛模型動(dòng)物產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用，并進(jìn)一步探究BTX-A 對(duì)疼痛行為學(xué)、熱痛閾、背根脊神經(jīng)神經(jīng)元中Nav1.8 蛋白表達(dá)的影響，以便了解BTX-A 在實(shí)驗(yàn)研究中**疼痛的效果和作用機(jī)制。

在大鼠右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射4%木瓜蛋白酶溶液后，其導(dǎo)致的炎癥改變一般發(fā)生于5 天左右，主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫痛及活動(dòng)受限，行走拖后腿等不協(xié)調(diào)步態(tài)。模型成功后節(jié)腔內(nèi)注射BTX- A 及注射用水（WFI），從自發(fā)疼痛步態(tài)分析可見，與WFI 組相比， BTX-A 組的大鼠自發(fā)疼痛行為改善明顯，隨著注射后時(shí)間延長(zhǎng)(≤5 天），自發(fā)疼痛步態(tài)改善越明顯。從熱痛閾測(cè)定結(jié)果可分析到，模型組大鼠第1 天給予BTX-A 注射后24h 大鼠的熱痛閾值即明顯上升，且隨時(shí)間的延長(zhǎng)其緩解疼痛效果逐漸明顯，一直可持續(xù)到注射后第 5 天且BTX- A 組熱痛閾明顯高于WFI 組。說(shuō)明BTX-A 的確對(duì)關(guān)節(jié)炎有鎮(zhèn)痛作用。

研究顯示注射BTX-A1 天后即可緩解疼痛，表明其鎮(zhèn)痛作用機(jī)制可能存在更多解釋。研究顯示當(dāng)外周收到傷害感受后，初級(jí)感覺傳入神經(jīng)元可產(chǎn)生異常的自發(fā)電活動(dòng)，這種異位沖動(dòng)的產(chǎn)生可能在病理性疼痛形成中起至關(guān)重要的作用[13—14]，而Matak 等[15]研究發(fā)現(xiàn)外周足部應(yīng)用少量的BTX-A 后，可經(jīng)坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)至脊髓，因此推測(cè)BTX-A 可能通過影響感覺傳入的異常興奮而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。DRG 神經(jīng)元是感覺信號(hào)傳導(dǎo)的**級(jí)神經(jīng)元，在痛覺感知和傳導(dǎo)過程中起著重要的作用。電壓門控鈉離子通道Nav1.8 和 Nav1.9 特異性表達(dá)在脊神經(jīng)節(jié)，其中Nav1.8 主要介導(dǎo)產(chǎn)生動(dòng)作電位上升支的80%的內(nèi)向電流，激活其動(dòng)作電位使痛覺上傳[16]。在本實(shí)驗(yàn)中， 通過**組織化學(xué)法檢測(cè)到BTX-A 干預(yù)后脊神經(jīng)節(jié)Navl.8 蛋白表達(dá)量下降。因此推測(cè)，BTX-A 可能通過影響 Nav1.8 蛋白的表達(dá)，減少神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，減少外周敏化，間接地減少**致敏從而起到鎮(zhèn)痛作用。本實(shí)驗(yàn)為BTX-A 在關(guān)節(jié)炎的疼痛**提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

       4 結(jié)論

①在右膝骨性關(guān)節(jié)炎模型中，予關(guān)節(jié)腔注射BTX-A，可改善其自發(fā)疼痛步態(tài)，在不同時(shí)間點(diǎn)（術(shù)后1 天、3 天、5 天)均有類似的鎮(zhèn)痛效果，且隨著注射后時(shí)間延長(zhǎng)(≤5 天），自發(fā)疼痛步態(tài)改善愈明顯。② 給予BTX-A 注射后，模型組大鼠24h 后熱痛閾值即明顯上升，且隨時(shí)間的延長(zhǎng)其緩解疼痛效果逐漸明顯，說(shuō)明BTX-A 可緩解疼痛，提高熱痛閾值。③在大鼠骨性關(guān)節(jié)炎模型中，通過關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射 BTX- A，可見脊神經(jīng)節(jié)中鈉離子通道Nav  1.8 表達(dá)下降，可能通過抑制DRG 神經(jīng)元中原本表達(dá)上調(diào)的Nav1.8 蛋白，減少**致敏，減輕關(guān)節(jié)疼痛，提高痛閾，從而起到鎮(zhèn)痛作用。