施灸赫依三穴對**模型大鼠行為學及腦組織ＩＬ－ ６含量的影響

乎寶力格１，高玉峰１＊ ，蘇日古嘎２

 （１ ．內(nèi)蒙古民族大學附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古  通遼０２８００７；２．內(nèi)蒙古民族大學，內(nèi)蒙古  通遼０２８０００）

摘    要：目的：觀察施灸赫依三穴對**模型大鼠行為學及腦干組織中ＩＬ－６ 含量的影響。方法：將６０只正常雄性ＳＤ 大鼠按體重隨機分為６ 組，分別為正常組、模型組、安定組、頂會穴組、赫依穴組和黑白際穴組，每組各１０只。除正常組外，其余５ 組腹腔注射 ＰＣＰＡ 混懸液（１ｍＬ／１００ｇ），連續(xù)注射２ 天制造大鼠**模型。成功造模后進行干預(yù)：正常組常規(guī)喂養(yǎng)；模型組每天抓取固定１次，常規(guī)喂養(yǎng)；安定組灌胃安定（***）注射液（０．９２ｍｇ／ｋｇ），每日１次，連續(xù)灌胃７天；頂會穴組、赫依穴組和黑白際穴組分別施灸相應(yīng)的穴位，每日施灸１次，每次５ｍｉｎ，連續(xù)７天。通過轉(zhuǎn)棒平衡實驗和定位航行實驗觀察比較各組大鼠棒上停留時間和找到平臺的時間，并采用 ＥＬＩＳＡ 法檢測大鼠腦干ＩＬ－６ 的含量。結(jié)果：轉(zhuǎn)棒平衡實驗：模型組大鼠在轉(zhuǎn)棒上維持時間縮短，與正常組比較差異具有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）。與模型組比較，安定組、赫依穴組、頂會穴組、黑白際穴組大鼠在轉(zhuǎn)棒上維持的時間顯著增加，差異具有統(tǒng)計學意義

（Ｐ＜０．０５）；定位航行實驗：模型組大鼠找到站臺的時間延長，與正常組比較差異具有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜ ０．０５）。與模型組比較，安定組、赫依穴組、頂會穴組、黑白際穴組大鼠找到站臺的時間顯著縮短，差異具有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）；模型組大鼠腦干中ＩＬ－６ 含量顯著高于正常組，差異具有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜ ０．０５）。與模型組比較，安定組、赫依穴組、頂會穴組、黑白際穴組大鼠腦干中ＩＬ－６ 含量顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）。結(jié)論：蒙醫(yī)施灸赫依三穴可降低**大鼠腦干中ＩＬ－６含量，從而使大腦興奮性降低，其機制可能與調(diào)節(jié)**大鼠腦干中ＩＬ－６含量相關(guān)。

關(guān)鍵詞：**；蒙醫(yī)灸療；行為學；白細胞介素－６

隨著社會的發(fā)展、生活節(jié)奏的加快，**成為流行病之 一，其嚴重影響人們生活質(zhì)量，可誘發(fā)諸多**。蒙醫(yī)理論  認為**的病因分為外因和內(nèi)因，外因系勞逸失調(diào)、思慮太 過、驚嚇、失血等，內(nèi)因系赫依琪素紊亂累及心臟白脈，大多屬“赫依病”范疇。前期研究［１－２］已表明，施灸赫依三穴對**模型大鼠有**作用，可降低**神經(jīng)系統(tǒng)中重要的神經(jīng)遞質(zhì)———ＮＯ 與 ＮＯＳ的活性。白細胞介素－６（ＩＬ－６）是具有多種生物學功能的細胞因子，參與睡眠－ 覺醒過程，具有調(diào)控睡眠的作用［３］。筆者在前期研究的基礎(chǔ)上觀察施灸赫依三穴對**大鼠行為學變化及腦干內(nèi)ＩＬ－６ 含量的影響，進一步探討其****的作用機制。

１ 材料與試藥

１．１   實驗動物

實驗動物選擇健康雄性 ＳＤ 大鼠６０ 只，體重約（２００± １０）ｇ，全部大鼠均由沈陽實驗動物中心 提供，合 格證號：

（ＳＸＳＫ（遼）２０１５－０００１）。

１．２   試劑與儀器

ＺＢ－２００疲勞轉(zhuǎn)棒儀（北京智鼠多寶生物科技有限責任公司）；ＡＵＷ１２０Ｄ 型島津電子天平（日本島津）；定位航行試驗水槽（北京智鼠多寶生物科技有限責任公司）；Ｂｉｏｔｅｋ Ｅｌｘ８００酶標儀（美國Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司）；對氯苯丙氨酸（ＰＣＰＡ）（  北京環(huán)亞太克生物醫(yī)學技術(shù)有限公司）；艾灸貼（蘇州東方艾絨廠）；ＩＬ－６酶聯(lián)**分析（ＥＬＩＳＡ）試劑盒（廣州瑞博奧生物科技有限公司）。

２ 方 法

２．１   造模方法

本實驗采用公認的對氯苯丙氨酸（ＰＣＰＡ）造模法制備**大鼠模型［４］。將 ＰＣＰＡ 用生理鹽水配制成混懸液（ ４５ｍｇ／１００ｇ），除正常組外，其余組大鼠腹腔注射 ＰＣＰＡ 混懸液（１ｍｇ／１００ｇ），每天１次，連續(xù)注射２天。大鼠出現(xiàn)活動明顯頻繁，對外界的聲、光等刺激異常敏感，興奮性增高，晝伏夜出節(jié)律消失等，表明造模成功。

２．２   分組及處理方法

將６０只ＳＤ 雄性大鼠隨機分為６ 組，即正常組、模型組、安定組、頂會穴組、赫依穴組、黑白際穴組，每組１０只。正常組：大鼠腹腔注射19%氯化鈉溶液（１ｍＬ/ １００ｇ）

每日１次，連續(xù)注射２日；與**組相同的抓取、固定，不做任何**，連續(xù)７天。

模型組：造模成功后同灸療組一樣抓取，固定。安定組：造 模成功 后，采 用 安 定 （地 西 泮 ）注 射 液，０．９２ｍｇ／ｋｇ，每日１次，連續(xù)灌胃７天。頂會穴組：造模成功后施灸大鼠頂會穴，每日１ 次，連續(xù)７天。赫依穴組：造模成功后施灸大鼠赫依穴，每日１ 次，連續(xù)７天。黑白際穴組：造模成功后施灸大鼠黑白際穴，每日 １ 次，連續(xù)７天。

２．３   觀察指標與檢測方法

２．３．１轉(zhuǎn)棒平衡實驗［５］ 實驗裝置為單頭固定的水平棒。先將疲勞轉(zhuǎn)棒儀調(diào)整到訓練狀態(tài)，使各組大鼠適應(yīng)，再將疲勞轉(zhuǎn)棒儀調(diào)到２０ｒ／ｍｉｎ，當直棒轉(zhuǎn)動時，將大鼠放在轉(zhuǎn)棒上，記錄大鼠在轉(zhuǎn)棒上持續(xù)不落降的時間，每只大鼠重復測定３次，取平均值。

２．３．２  定位航行實驗［６］ 實驗時向水箱里加入自來水和適量牛奶，使液體與水箱顏色一致，水平面高于站臺２ｃｍ，水溫控制在（２４±２）℃。實驗前將各組大鼠放入水箱內(nèi)自由游泳，若１２０ｓ未找到站臺，人為將其移至到站臺上，使大鼠熟悉水箱內(nèi)環(huán)境。測試時將大鼠沿水箱壁輕巧放入水池，記錄大鼠找到站臺的時間，若大鼠放入水中１２０ｓ內(nèi)未找到站臺，以１２０ｓ計。

２．３．３  大鼠腦干中ＩＬ－６ 含量測定［７］ 將６ 組大鼠快速斷頭處死，冰上迅速取大腦干稱重，－８０℃ 冰箱保存待測。取１００ｍｇ組織加入５００μＬ 裂解液，冰上裂解３０ｍｉｎ，每５ｍｉｎ振蕩１次，在冰上用高速分散切割機進行組織破碎，冷凍離心機離心，１３０００ｒｐｍ，２０ｍｉｎ，取上清液。采用 ＥＬＩＳＡ 法，按照ＩＬ－６試劑盒說明書的步驟，在酶標儀上的５４０～５９５ｎｍ波長范圍內(nèi)檢測吸光度，其中５６２ｎｍ 波長為*佳測量光密度值，計算出ＩＬ－６含量。

２．４   統(tǒng)計學方法

所得數(shù)據(jù)錄入ＳＰＳＳ１７０統(tǒng)計學軟件，連續(xù)性計量資料以平方差（珚 ）表示，數(shù)據(jù)比較使用獨立樣本 檢驗。等級數(shù)據(jù)資料以百分比（％）表示，數(shù)據(jù)間比較采用卡方檢驗。Ｐ＜０．０５為差異具有統(tǒng)計學意義。

３ 結(jié) 果

３．１   各組大鼠轉(zhuǎn)棒平衡實驗結(jié)果比較

與正常組相比，模型組大鼠在轉(zhuǎn)棒上維持時間縮短，差異具有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）。與模型組比較，安定組、赫依穴組、頂會穴組和黑白際穴組大鼠在轉(zhuǎn)棒上維持時間延長，差異具有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）。見表１。