1 材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 藥品與試劑 普萊特康膠囊為本實驗室自制； 諾迪康膠囊為西藏諾迪康藥業(yè)產(chǎn)品（批號140104）； 多聚甲醛、尿素氮試劑盒、全血乳酸試劑盒、肝/肌糖原測定試劑盒、丙二醛試劑盒、超氧化物歧化酶試劑盒，均購自南京建成生物工程公司。

1.1.2 藥品及儀器設(shè)備 普萊特康膠 囊（批 號201502）；5417R 高速低溫離心機(jī)（德國Eppendorf）； Bio-Rad 680 酶標(biāo)儀（美國Bio-Rad）；鼠轉(zhuǎn)棒式疲勞儀（北京智鼠多寶生物科技）；電熱恒溫水浴鍋（天津歐諾）。

1.2 方 法

1.2.1 動物與分組 將90 只昆明種雄性小鼠稱重、排序、編號，用隨機(jī)分組數(shù)據(jù)表分為6 組：溶媒對照組（C 組）、疲勞模型組（M 組）、普萊特康高（H 組）、中（I 組）、低（L 組）劑量組、諾迪康對照組（N，諾迪康膠囊），每組15 只。飼養(yǎng)溫度控制在（23±2）℃，飲水充足。小鼠適應(yīng)環(huán)境3 d后開始灌胃，每天早晨8：00撤去飼料，15：00 進(jìn)行灌胃，連續(xù)灌胃7 d。高劑量組、中劑量組和低劑量組每只小鼠每天攝入普萊特康的劑量依次為：750 、375、187.5 mg·（kg·d）-1，諾迪康組攝入諾迪康的劑量為375 mg·（kg·d）-1，溶媒對照組和疲勞模型組給予等體積的生理鹽水。

1.2.2 轉(zhuǎn)棒疲勞實驗 各組小鼠每天灌胃后進(jìn)行轉(zhuǎn)棒練習(xí)30 min，讓每只小鼠學(xué)習(xí)轉(zhuǎn)棒方法。在末次給藥60 min 后進(jìn)行小鼠轉(zhuǎn)棒疲勞實驗，記錄每只小鼠的在棒時間。

1.2.3 負(fù)重游泳實驗 轉(zhuǎn)棒疲勞實驗12 h 后，在小鼠尾部負(fù)荷10%體質(zhì)量的鉛條，置于游泳箱中，水深為40 cm，水溫為（37±3）℃游泳，直至小鼠力竭，記錄小鼠自游泳開始到力竭的時間，判斷力竭的標(biāo)準(zhǔn)為小鼠連續(xù)3 次不間斷沉底。負(fù)重游泳后立即用電吹風(fēng)吹干小鼠，而后摘小鼠眼球取血備用；取肝臟、股四頭肌，用生理鹽水漂洗后，濾紙吸干，稱重備用。

1.2.4 小鼠全血乳酸測定  取小鼠全血100 μl，加入蛋白沉淀劑600 μl，混勻，3 500 r/min，離心10 min，取上清液按照試劑盒說明書方法檢測各組小鼠全血乳酸含量。

1.2.5 小鼠血清 SOD 活性、BUN 及 MDA 含量 取全血3 000 r/min 離心15 min，取上層血清，按照試劑盒說明書方法檢測各組小鼠血清超氧化物歧化酶（superoxide   dismutase，SOD） 活 性 、 血 清 尿 素 氮（blood urea nitrogen，BUN）及脂質(zhì)過氧化物丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量。

1.2.6 小鼠肝糖元、肌糖原測定 取小鼠肝臟、股四頭肌，按樣本重量（mg）:堿液體積（μ l）=1:3，一起加入試管中，沸水浴煮20 min，流水冷卻，按照試劑盒說明書方法檢測各組小鼠肝糖原和肌糖原含量。

1.2.7 數(shù)據(jù)處理 用 Graphpad 軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行圖表處理，用SPSS 軟件進(jìn)行分析處理。數(shù)據(jù)以（x± s）表示數(shù)據(jù)分析采用單因素方差分析，多重比較采用LSD 法，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 普萊特康膠囊對小鼠在棒時間的影響

如圖1 所示，與疲勞模型組相比，中劑量組小鼠在棒時間顯著增長（P<0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，高劑量組和低劑量組以及諾迪康組均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。

2.2 普萊特康膠囊對小鼠負(fù)重游泳力竭時間的影響

如圖2 所示，與疲勞模型組相比，普萊特康膠囊高劑量組小鼠負(fù)重游泳力竭時間顯著延長（P< 0.01）；中、低劑量組小鼠負(fù)重游泳力竭時間比疲勞模型組顯著延長（P<0.05）；諾迪康組小鼠與疲勞模型組小鼠相比，負(fù)重游泳時間基本無變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

2.3普萊特康膠囊對小鼠血清SOD 活力和MDA、BUN 含量的影響

如表1 所示，與溶媒對照組相比，疲勞模型組小鼠血清 SOD 活力顯著降低（P＜0.05），MDA 和 BUN含量顯著升高（P＜0.05）；給予**處理后，普萊特康高、中、低劑量均能顯著提高小鼠血清SOD 活力（P＜0.05），并且降低MDA 含量（P＜0.05），高、中劑量組小鼠血清尿素氮水平顯著下降（P＜0.05），低劑量組與疲勞模型組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞ 0.05）。

2.4普萊特康膠囊對小鼠全血乳酸含量的影響

如圖3 所示，與溶媒對照組相比，疲勞模型組小鼠全血乳酸含量顯著升高（P＜0.05）；給予**處理后，普萊特康高、中、低劑量組小鼠全血乳酸含量均顯著降低（P＜0.05）。諾迪康組與疲勞模型組比無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。

3討 論

疲勞是機(jī)體的體力和腦力活動達(dá)到一定程度后，一種會必然發(fā)生的正常生理現(xiàn)象，它與多種生理生化因素相關(guān)。因此，疲勞實際上是機(jī)體的一種保護(hù)性機(jī)制，同時也是機(jī)體發(fā)展成為病理狀態(tài)的前兆[8]。第5 屆國際運(yùn)動生物化學(xué)會議上給“運(yùn)動性疲勞”作出明確定義：“機(jī)體生理不能保持其機(jī)能在一特定水平上和/或不能維持預(yù)定的運(yùn)動強(qiáng)度”[9]。

抗疲勞保健品研發(fā)要求動物實驗的項目有：動物負(fù)重游泳實驗、全血乳酸含量、血清尿素氮含量、肝糖原及肌糖原含量；判定標(biāo)準(zhǔn)為：動物負(fù)重游泳實驗結(jié)果為陽性，血乳酸含量、血清尿素氮含量、肝糖原及肌糖原含量任2 項指標(biāo)為陽性。本研究先使小鼠在勻速轉(zhuǎn)動的轉(zhuǎn)棒上行走直至力竭后掉落，通過“跌落光電自動記錄系統(tǒng)”記錄小鼠的在棒時間， 小鼠在棒時間越長，說明其耐疲勞能力越強(qiáng)。結(jié)果表明，普萊特康中劑量組小鼠在棒時間與疲勞模型組相比顯著延長，但高、低劑量組與疲勞模型組相比差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，分析原因可能是由于小鼠在棒時間不僅受小鼠體力的影響，還受小鼠智力、肢體協(xié)調(diào)性及體質(zhì)量等諸多因素影響，故小鼠個體差異性對結(jié)果影響較大。進(jìn)一步采用游泳運(yùn)動動物疲勞模型，通過小鼠負(fù)重游泳力竭時間來反映機(jī)體對疲勞的耐受能力[10]，結(jié)果表明，普萊特康膠囊能顯著延長小鼠負(fù)重游泳力竭時間，提高小鼠抗疲勞能力。另外，本研究還通過檢測小鼠血清中 SOD、MDA、BUN 和全血乳酸含量等生化指標(biāo)，排除由于小鼠智力、肢體協(xié)調(diào)性及體質(zhì)量等個體差異因素對

小鼠在棒時間及負(fù)重游泳力竭時間的影響。

運(yùn)動疲勞會導(dǎo)致機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)[11]，引起機(jī)體自由基產(chǎn)量增加，同時脂質(zhì)過氧化水平也隨之提高，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，此時，SOD 等抗氧化酶被大量消耗，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA 大量生成，因此， SOD 和MDA 水平變化可反映機(jī)體內(nèi)自由基生成情況及脂質(zhì)過氧化程度，進(jìn)而間接反映機(jī)體疲勞損傷程度[12]。本研究結(jié)果表明，普萊特康膠囊能顯著提高負(fù)重游泳小鼠血清SOD 活性，降低MDA 含量，提示普萊特康膠囊能夠通過**自由基，抑制脂質(zhì)過氧化作用，提高小鼠抗疲勞能力。

糖是機(jī)體運(yùn)動所需能量的主要來源，它在肝臟和肌肉等組織中以糖原形式儲存，運(yùn)動時肌肉和肝臟中糖原被大量消耗[13]，當(dāng)能量供應(yīng)不上時，無氧酵解就會增加，引起血乳酸及BUN 快速升高[12]，因此，肌肉及肝臟組織中糖原含量的變化及血中乳酸和BUN 含量的變化可反映出機(jī)體運(yùn)動后的疲勞程度。本實驗研究結(jié)果表明普萊特康能顯著提高小鼠肝糖原和肌糖原含量，增加運(yùn)動時的能量供給， 減少血乳酸和BUN 的產(chǎn)生，從而提高產(chǎn)能效率，發(fā)揮抗疲勞作用。

綜上所述，普萊特康膠囊具有顯著的抗小鼠運(yùn)動性疲勞作用，其作用機(jī)理可能是一方面通過抑制小鼠肝糖原和肌糖原分解，增加能源物質(zhì)儲備，降低葡萄糖的無氧酵解，減少血乳酸和BUN 的產(chǎn)生， 提高產(chǎn)能效率，另一方面通過**自由基，抑制脂質(zhì)過氧化作用，減少疲勞應(yīng)激損傷。